蔗糖磷酸化酶試劑（Sucrose Phosphorylase）屬于糖基水解酶13家族，是一種催化轉(zhuǎn)移葡萄糖苷鍵的酶，能夠催化蔗糖和無機(jī)磷酸

鹽合成1-磷酸-葡萄糖。該酶主要以蔗糖、1-磷酸-葡萄糖為供體，多類物質(zhì)如多羥基的糖和糖醇、酚羥基、羧基等為受體，

催化合成各種糖苷。該蔗糖磷酸化酶通過重組制備而得，其催化蔗糖（sucrose）的磷酸化反應(yīng)，生成

D-fructose和α-D-glucose-1-phosphate，反應(yīng)式為： Sucrose+Pi=α-D-glucose-1-phosphate+D-fructose。

 該蔗糖磷酸化酶的比活>100U/mg，該酶通過改造可耐熱，反應(yīng)溫度可在30~65℃進(jìn)行，最佳反應(yīng)溫度為55℃。在60℃孵育

60h后活性損失<30%。

組分

組分名稱數(shù)量

Sucrose Phosphorylase (0.5 U/μl)500 μl

活性定義

1單位指在37°C，pH 7.6條件下，每分鐘由蔗糖催化生成1.0 μmole的D-fructose所需的酶量。反應(yīng)緩沖液為100mM KH2PO4，200mM Sucrose，pH7.6。

儲(chǔ)存

-20℃可保存2年。

蔗糖磷酸化酶試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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