慢病毒感染細(xì)胞|為什么你的感染效率那么差?

慢病毒不但可感染分裂或非分裂細(xì)胞，還可將外源基因有效地整合到宿主染色體上，從而實(shí)現(xiàn)持久表達(dá)，

又不易引發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng)，被譽(yù)為細(xì)胞實(shí)驗(yàn)佳選的工具病毒。

并且慢病毒作為基因治療載體在各類遺傳性和后天性的人類疾病的治療中倍受歡迎：從基礎(chǔ)研究到臨床應(yīng)用，高純度、高滴度的慢病毒都是基因操作的理想工具。

由于實(shí)驗(yàn)中使用的細(xì)胞類型不同，慢病毒感染的效率也會(huì)有差異；要想提高慢病毒的感染效率，合適的實(shí)驗(yàn)步驟和最佳的實(shí)驗(yàn)條件是成功的關(guān)鍵！

以“24孔培養(yǎng)板、貼壁細(xì)胞"為例，慢病毒感染細(xì)胞的常規(guī)操作步驟是這樣的：

Day 0

接種細(xì)胞：

每孔按5×個(gè)待感染細(xì)胞鋪板，用含有 10% FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng);

Day 1

細(xì)胞感染：

感染前，根據(jù)說明書用培養(yǎng)基配置感染液，備用吸掉舊培養(yǎng)基，更換為感染液; 并參考細(xì)胞 MOI值，計(jì)算病毒使用量，加入病毒進(jìn)行感染，混勻;

Day 2

病毒感染8-16h后，換回常規(guī)培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng);

Day 3-4

確認(rèn)感染效果：

感染72h后，顯微鏡下觀察感染效果，如EGFP、Cherry的表達(dá)情況；

如果你以為所有的細(xì)胞操作都這么簡單的話，那真的是too young too simple！

那么在慢病毒感染細(xì)胞過程中，到底會(huì)遇到哪些問題呢？

在細(xì)胞感染時(shí)， MOI是一個(gè)非常重要的指標(biāo)，如何確定MOI值呢？

MOI:復(fù)感染指數(shù)，是指病毒對細(xì)胞的感染能力，MOI越高，細(xì)胞越難被感染。通常把某株細(xì)胞有80%被感染時(shí)所用的病毒顆粒數(shù)和細(xì)胞數(shù)目

的比值作為該株細(xì)胞的MOI。

MOI=（病毒滴度×病毒體積）/細(xì)胞數(shù)目

感染條件及MOI的選擇原則：

1. 在細(xì)胞形態(tài)不受影響的情況下盡可能用少的病毒感染細(xì)胞

2. 選擇感染效率80%左右的作為最佳感染條件

通過細(xì)胞感染預(yù)實(shí)驗(yàn)可以知道慢病毒對細(xì)胞的最佳感染條件，來確定細(xì)胞的MOI，進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。